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GST pull down實(shí)驗技術(shù)

GSTPulldown實(shí)驗技術(shù)1.實(shí)驗原理Pulldown技術(shù)是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標簽（如：GST標簽、His標簽）進(jìn)行融合表達，而帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲，形成"次級親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）融合標簽從細菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...

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常用的細胞凋亡檢測方法【大盤(pán)點(diǎn)】

細胞凋亡人體內的細胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關(guān)細胞死亡過(guò)程的研究，已成為生物學(xué)、醫學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。已知的細胞死亡方式起碼有兩種，即細胞壞死與細胞凋亡(apoptosis)。細胞壞死是早已被認識到的一種細胞死亡方式，而細胞凋亡則是逐漸被認識的一種細胞死亡方式。此圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )細胞凋亡是細胞的一種基本生物學(xué)現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著(zhù)必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內環(huán)境的穩定以及多個(gè)系統的發(fā)育中起著(zhù)重要的作用。細胞凋亡不僅...

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【表觀(guān)遺傳】中樞性性早熟研究

中樞性性早熟（CPP）是兒科內分泌的常見(jiàn)疾病，發(fā)病率較高，且逐年增加趨勢明顯。CPP可以導致患者或者家長(cháng)出現社會(huì )、心理問(wèn)題，而且還可能?chē)乐負p害兒童的終身高。因此，CPP是兒科內分泌醫生密切關(guān)注的疾病之一。CPP發(fā)病原因目前尚不明確，可能是由于某種因素促發(fā)了下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元，使其提前活化，通過(guò)分泌大量的GnRH，進(jìn)而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺（5-HT）最初在血清中發(fā)現，又名血清素，是一種吲哚衍生物，它廣泛存在于哺乳動(dòng)物中。5-HT由色氨酸代...

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細胞生物學(xué)實(shí)驗

細胞生物學(xué)實(shí)驗及其定制化解決方案常用的細胞生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗，主要包含：細胞培養、細胞保種、原代細胞分離和培養、細胞增殖檢測（MTT法/CCK8法）、細胞凋亡、細胞周期、細胞遷移、細胞侵襲、流式細胞分選、慢病毒包裝及穩轉株篩選、電生理檢測、定制化細胞模型等。原代細胞分離我司可提供細胞培養和原代細胞分離的服務(wù)。例如：原代schwann細胞、原代海馬神經(jīng)元細胞、原代成骨細胞、臍帶間充質(zhì)干細胞、海綿體平滑肌細胞等。細胞培養與傳代細胞凍存/保種細胞復蘇細胞換液培養細胞傳代培養細胞共培養細...

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細胞低氧培養模型簡(jiǎn)介

人的生存離不開(kāi)氧氣。如果你感覺(jué)很長(cháng)一段時(shí)間里整天無(wú)精打采、昏昏欲睡，在排除睡眠不足的因素外，那么你有可能是血液中缺氧了。血液除了能在身體內流動(dòng)，攜帶能量、廢物等，最主要的功能就是攜帶氧氣，這是它的基本功能之一。如果血液缺氧，嚴重時(shí)就會(huì )導致器官病變，最常見(jiàn)的就是心梗、腦梗等。近年來(lái)，低氧(Hypoxic)于生物機體及細胞的生理作用及其分子機制研究越來(lái)越受到醫學(xué)科研學(xué)者的關(guān)注。低氧培養的適用研究領(lǐng)域近30年來(lái)與“低氧誘導”相關(guān)的文章統計(此項數據來(lái)源于Pubmed數據庫)細胞是生...

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細胞焦亡研究中的檢測指標有哪些？

細胞焦亡是什么？細胞凋亡（Apoptosis）是經(jīng)典的細胞死亡方式，但隨著(zhù)研究的不斷深入，很多細胞死亡現象并不能用細胞凋亡來(lái)解釋?zhuān)S著(zhù)研究的深入，科學(xué)家又陸續發(fā)現了一些新的細胞死亡新機制。細胞焦亡（Pyroptosis）便是近年來(lái)發(fā)現并證實(shí)的一種炎癥程序性細胞死亡，其特征為依賴(lài)于炎性半胱天冬酶（主要是caspase-1，4，5，11），并伴有大量促炎癥因子的釋放。細胞焦亡可由各種病理刺激引發(fā)，如中風(fēng)、心臟病發(fā)作、癌癥、感染等。按照激活機制，細胞焦亡可分為Caspase-1依賴(lài)...

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如何選擇合適的內參抗體？

如何選擇合適的內參抗體？Tips：在選擇內參抗體時(shí)，我們需要遵循幾個(gè)原則：1.種屬來(lái)源哺乳動(dòng)物的樣本需要選擇哺乳動(dòng)物中穩定表達的蛋白作為內參，同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩定表達的蛋白作為內參。2.細胞定位靶標蛋白的細胞定位不同，適合的內參也不同。如全細胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般選擇NaKATPase，核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量?jì)葏⒌鞍椎姆肿恿啃枰c目標蛋白的分子量有所區別，否則兩者條帶無(wú)法分...

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TUNEL法細胞凋亡檢測假陽(yáng)性率高怎么破？

TUNEL法基于對細胞DNA損傷的檢測，通?？捎糜跈z測組織切片樣本和細胞樣本，是晚期細胞凋亡檢測中常用的方法。那么對于檢測過(guò)程中常見(jiàn)的假陽(yáng)性率高的現象是如何產(chǎn)生的呢？1.固定操作不當固定液選擇不恰當，固定液濃度過(guò)高，固定時(shí)間過(guò)長(cháng)，組織切片過(guò)厚都會(huì )影響固定效果。一般建議選擇含4%多聚甲醛的PBS溶液來(lái)固定細胞或組織切片，時(shí)間在30min左右。2.基因轉錄水平高基因轉錄活性高的非凋亡細胞會(huì )產(chǎn)生假陽(yáng)性，例如睪丸組織。3.激發(fā)光下長(cháng)時(shí)間照射在強激發(fā)光長(cháng)時(shí)間照射下，高濃度的PI會(huì )吸收能...

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