一、技術(shù)簡(jiǎn)介

RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）技術(shù)是一種用于研究細胞內RNA與蛋白質(zhì)相互作用的關(guān)鍵實(shí)驗方法，能夠揭示RNA結合蛋白（RBP）在轉錄后調控中的功能機制。

二、技術(shù)原理

RIP利用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來(lái)，通過(guò)分離純化，對結合在復合物上的RNA 進(jìn)行RT-PCR驗證或測序分析，結果更具生物學(xué)說(shuō)服力。

三、應用場(chǎng)景

1.基礎機制：解析RNA結合蛋白（如AGO2、Polycomb復合物）的功能及RNA調控網(wǎng)絡(luò )。

2.疾病研究：比較疾病與正常樣本中RNA-蛋白互作差異，發(fā)現潛在生物標志物（如癌癥相關(guān)lncRNA）。

3.藥物開(kāi)發(fā)：評估藥物對RNA-蛋白互作的影響，加速靶點(diǎn)篩選。

四、技術(shù)優(yōu)勢

1.靈敏度較高：可檢測低豐度RNA與蛋白的微弱相互作用。

2.動(dòng)態(tài)范圍廣：從少量細胞（如5×10?個(gè)）到復雜組織樣本均適用。

3.多組學(xué)聯(lián)用：結合RNA-Seq、CLIP-Seq或ChIP-Seq，構建多維調控網(wǎng)絡(luò )。

五、樣本類(lèi)型

新鮮細胞（貼壁細胞/懸浮細胞）、凍存細胞、凍存組織、交聯(lián)后細胞樣本。

六、樣本需求

細胞樣本：約1×10^7個(gè)（可以是1個(gè)10cm皿，或以懸浮細胞形式存儲于離心管中，或1個(gè)T75瓶）；

凍存組織：約70mg；交聯(lián)細胞樣本：使用1%甲醛交聯(lián)處理細胞。

七、樣本準備&運輸

活細胞樣本：距離較近的可以將養在皿/T75瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞（最遲次日達）運輸，本市內可閃送或親自遞送，距離較遠的，可-80℃凍存細胞干冰運輸；

組織樣本&交聯(lián)后細胞樣本：-80℃凍存干冰運輸。

八、需提供的試劑

檢測用ChIP級抗體。

九、實(shí)驗周期

1-2周（不包含測序）

十、其他

后續檢測選擇RT PCR時(shí)，需提供后續檢測的位點(diǎn)。

甲醛交聯(lián)細胞具體步驟：①在細胞皿中加入終濃度為1%的甲醛，37℃孵育10分鐘；②使用含[1mM PMSF，1μg/ml抑肽酶和1μg/ml pepstatin A]的冰冷DPBS洗滌細胞兩次。③將細胞刮入含有蛋白酶抑制劑的2ml冰冷的DPBS中，并轉移到離心管中，凍存寄送。