在本研究中，作者將VEGF封裝的活化中性粒細胞外泌體模擬物（aPMNEM）裝入ECM，以開(kāi)發(fā)用于治療慢性傷口的VEGF-aPMNEM-ECM。首先對納米材料進(jìn)行合成，而后驗證aPMNEM的質(zhì)量，作者使用了TEM，Western blotting, NTA和Zeta電位測量進(jìn)行了表征。TEM和NTA結果顯示，aPMNEM的直徑約為160nm，與PMNExo、aPMNExo和PMNEM的大小相似。Zeta電位測量顯示，aPMNEM的電位約為-40 mV，與PMNExo、aPMNExo和PMNEM的表面膜電位相似。為了量化aPMNEM的產(chǎn)量，作者測量了由相同數量的細胞通過(guò)NTA產(chǎn)生的PMNExo、aPMNExo、PMNEM和aPMNEM的數量。NTA顯示，通過(guò)多層過(guò)濾擠出生產(chǎn)的aPMNEM產(chǎn)量約為aPMNExo產(chǎn)量的10倍。接下來(lái)，為了研究aPMNEM的質(zhì)量，作者進(jìn)行了4D無(wú)標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析，并通過(guò)主成分分析（PCA）、火山圖分析和熱圖分析比較了aPMNEM和PMNExo的蛋白質(zhì)含量。PCA顯示aPMNEM和PMNExo蛋白含量不同。此外，蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現，與PMNExo相比，aPMNEM中有1807種不同的蛋白質(zhì)類(lèi)型具有顯著(zhù)差異。與PMNExo相比，aPMNEM中差異表達的蛋白中有1501個(gè)蛋白上調（折疊變化>2），306個(gè)蛋白下調（折疊變化>2）。GO注釋分析顯示aPMNEM與PMNExo具有相似的生物過(guò)程、細胞成分和分子功能。在殺菌相關(guān)蛋白中，中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂鈣蛋白（LCN2）、溶菌酶（LYZ）和肽聚糖識別蛋白（PGLYRP1）上調，而補體C3（C3）、髓過(guò)氧化物酶（MPO）和補體C4-B（C4B）在PMNEM中與PMNExo相比下調。最后作者通過(guò)物理冷凍結合SDS-Triton洗脫法制備了溫度敏感的ECM水凝膠。

為了驗證VEGF-aPMNM-ECM的生物相容性，作者通過(guò)H&E染色法觀(guān)察這些器官的生理結構變化。結果顯示，與PBS處理的對照組相比，VEGF-aPMNM-ECM對SD大鼠全層皮膚創(chuàng )面模型無(wú)明顯的病理改變，說(shuō)明VEGF-aPMNM-ECM對SD大鼠全層皮膚創(chuàng )面模型無(wú)毒性作用。同時(shí)使用了小動(dòng)物體內成像驗證VEGF - aPMNEM在創(chuàng )面的生物分布，顯示出aPMNEM在傷口部位保持48小時(shí)的功能，并且不隨時(shí)間擴散。

VEG為了確定ECM的組成，作者通過(guò)進(jìn)行4D無(wú)標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析來(lái)分析ECM的蛋白質(zhì)含量。在ECM水凝膠中共發(fā)現112種蛋白質(zhì)。生物信息學(xué)研究揭示了ECM與“細胞外成分"之間的相關(guān)性。根據以往的研究，那些數量較多的蛋白，如膠原I，可使M1巨噬細胞轉化為M2巨噬細胞。CD86 (M1巨噬細胞表面標記物)和CD206 (M2巨噬細胞表面標記物)抗體IF分析結果證實(shí)，ECM、aPMNEM - ECM和VEGF-aPMNEM-ECM治療組顯著(zhù)誘導M1巨噬細胞向M2巨噬細胞轉化；但三組間無(wú)明顯差異。