1. 將實驗小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。

      2. 仔細剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。

      3. 分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。

      4. 將真皮部分于培養皿內剪碎，加入適量胰酶，轉移至15ml離心管內，37℃恒溫水浴消化1h。

      5. 消化結束后，加入H-DMEM*培養基終止反應，1000rpm離心5min，棄上清。

      6. PBS清洗一遍，離心棄上清。

      7. 將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養皿內，加入2ml*培養基，37℃，5%CO₂培養箱內培養24h。

     8. 第二天，補充培養基至5ml，繼續培養，3-4天后有細胞游出。

     9. 7天后已有大量細胞游出，去除組織塊并換新鮮培養基繼續培養。

• 實驗圖例

細胞培養

END

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